The FACS of life, oder: Michael macht FACSen

Der Report meiner Träume!

Heute war der große Tag: ich habe 115 Fliegenhirne (zweimal 115, eigentlich) enzymatisch dissoziiert und mittels FACS in GFP-positive und -negative Zellen sortiert.
Nochmal: Meine Fliegen machen grünes Protein in bestimmten Zellen ihres Gehirns. Indem ich die Gehirne isoliere und mit einem Enzym behandele, dass das Hingewebe zersetzt und in einzelne Zellen zerlegt, kann ich aus einem Klumpen eine milchige Lösung machen, in der grüne Zellen (Neuronen) und andere Zellen frei herumschwimmen.
An diesem Punkt kommt FACS ins Spiel. FACS steht für "Fluorescence Activated Cell Sorting" und bedeutet in meinem Fall: grüne Zellen aussortieren.
WIe funktioniert das? Meine Zell-Lösung wird durch eine extrem feine Glaskapillare gepumpt, die so dünn ist, dass die Zellen "im Gänsemarsch" hindurchwandern. Ein Laser mißt dabei die Fluoreszenz einer jeden Zelle. Da bei meinen Fliegen nur Neuronen grün fluoreszierendes Protein erzeugen, leuchten nur Neuronen grün. Am Ende der Kapillare werden die Zellen in kleinen Tropfen (eine Zelle pro Tropfen) in ein Reganzglas getropft. Wenn der Laser eine grüne Zelle entdeckt, gibt er ein Signal an eine Kathode und Anode am Ende der Kapillare ab. Diese legen eine Spannung an das Kapillarenende an, die genau DEN Tropfen, der die grüne Zelle enthält, in ein zweites Reagenzglas umlenkt. Also: die Grünen ins Töpfchen, die Schlechten ins andere Töpfchen. So kann man in ein paar Minuten ein paar Millionen Zellen sortieren, und am Ende war ich stolzer Besitzer von 13.300 Glia-Zellen und 66.900 Neuronen, aus denen ich die RNA extrahiert habe. Was damit geschehen soll, erzähle ich Euch beim nächsten Mal.
Dies ist übrigens ein Beinahe-Novum, denn es gibt in der Literatur nur eine Beschreibung von FACS-sortierten Fliegenhirnen!

Today was the big day! i dissected 115 fly brains (2 times, actually) enzymatically and sorted them into GFP-positive and GFP-negative cells.
Again: My flies make a green fluorescent protein in distinct cells of their brain. I isolate their brains and treat them with an enzyme that cuts the brain tissue into individual cells. Thus, a pieve of gory insect brain turns into a suspension of single cells. This is where FACS comes into play. FACS stands for "Fluorescence Activated Cell Sorting", in my case, that menas "green cells are picked out of the suspension".
How does that work? My suspension is pumped through a tiny capillary, so thin that all cells have to move through it in single-file. A laser shines on each one of them and measures their ability to fluoresc in green light, which, in my case, are only neurons, for they make green protein. At the end of the capillary, the cells drip into a tube in tiny drops that contain one cel per drop. If the computer behind the laser registers a green cell, he applies an electric field to the end of the capillary. The drop containing the green cell is being re-directed by the electric field and drops into another tube than the rest of the cells. Thus, I can get a pure population of just one cell type!
This way, I can sort a few million cells in a few minutes, and in the end, I was proud owner of 13.300 glial cells and 66.900 neurons. From these, I extracted RNA. Why I did that, I will tell you next time.